高中生物
A．afp基因是培育抗冻番茄用到的目的基因
B．构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶
C．只要检测出番茄细胞中含有afp基因，就代表抗冻番茄培育成功
D．将抗冻蛋白基因afp导入番茄细胞前，一般先用Ca2+处理番茄细胞
B项，限制酶可将特定部位的磷酸二酯键切断，使目的基因和质粒产生相同的末端。DNA连接酶可催化磷酸二酯键的形成，将质粒与目的基因连接在一起。核酸酶是切断核苷酸链中磷酸二酯键的酶，可将DNA水解为一个个的脱氧核苷酸。构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶，不需要核酸酶。
C项，若检测出番茄细胞中含有afp基因，但该基因不表达，也不会形成抗冻番茄。只有番茄表现出抗冻性才能代表抗冻番茄培育成功，即进行个体生物学水平的鉴定。
D项，将抗冻蛋白基因afp导入农杆菌(微生物)前，一般先用ca2+处理农杆菌，使其处于感受态，便于吸收环境中的DNA。将目的基因导入番茄细胞(植物细胞)，常采用花粉管通道法或农杆菌转化法。
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